癌症异常值分析(COPA)是一种常见的分析,用于识别仅在特定比例的样本中下调或上调的基因。OPPAR是修改后的COPA的R实现gydF4y2Ba(mCOPA)gydF4y2BaWang Chenwei et al.于2012年首次发表。其目的是识别出与正常样本相比,有兴趣条件的样本中的异常值基因。OPPAR中实现的方法使用户能够以各种方式执行分析,即检测对照与条件样本中的离群值特征(无论是否有关于亚型的信息),以及如果亚型已知,则检测一个亚型与其他样本中的离群值基因。gydF4y2Ba
OPPAR也可用于基因集富集分析(GSEA)。这里是一个改良版gydF4y2BaGSVAgydF4y2Ba方法实现。GSVA可用于确定研究中哪些样本富集了感兴趣的基因表达特征。的gydF4y2BagsvagydF4y2Ba
GSVA包中的函数返回每个样本的富集分数,对于给定的签名/基因集。使用目前的方法,强烈显示富集下调(调控)基因表达签名的样本将得到负分。然而,生物学家和研究人员的利益往往是对向上和向下特征都丰富的样本获得正分数。因此,gydF4y2BagsvagydF4y2Ba
功能已被修改,为上调和下调基因表达签名富集的样本分配正分数。gydF4y2Ba
OPPAR有四个功能:gydF4y2Ba
这个小插图说明了OPPAR可能的工作流,使用gydF4y2BaTomlins等人。gydF4y2Ba前列腺癌gydF4y2Ba数据gydF4y2Ba.此外,gydF4y2BaMaupingydF4y2Ba为了在本研究中测量的样本中富集TGFb基因签名,已经对该公司的TGFb数据进行了分析。gydF4y2Ba
请注意,虽然这里的分析是在微阵列研究中完成的,但可以将oppar工具应用于NGS研究中基因表达测量的RPKM值。gydF4y2Ba
从GEO数据库中检索数据,根据mCOPA论文中概述的程序进行标准化和子集检查。此外,删除了没有注释的探测。的gydF4y2Ba嫁祸于gydF4y2Ba
包使用k -最近邻法(k = 10)来计算缺失值。子集数据集作为样本数据在包中可用,并包含一个ExpressionSet对象,存储关于样本、基因和基因表达的信息。我们应用gydF4y2BaopagydF4y2Ba
在Tomlins等人的数据,然后使用gydF4y2BagetSubtypeProbesgydF4y2Ba
得到所有下调和上调的异常值。gydF4y2Ba
opagydF4y2Ba
返回异常值配置矩阵,它是一个由-1(下调异常值)、0(非异常值)和1(上调异常值)组成的矩阵。有关更多信息,请参阅gydF4y2Baopa ?gydF4y2Ba
为一个简要的概述gydF4y2BaoppargydF4y2Ba
包装和功能,请见gydF4y2Baoppar ?gydF4y2Ba
##装载所需的包:针织机gydF4y2Ba
##数据(Tomlins)中的警告:数据集“Tomlins”未找到gydF4y2Ba
#前21个样本为正常样本,其余为正常样本gydF4y2Ba#样本是我们的病例(转移)。因此,我们产生了一个群体gydF4y2Ba#变量为基于此知识的样本。gydF4y2Bag < -gydF4y2Ba因素gydF4y2Ba(gydF4y2BacgydF4y2Ba(gydF4y2Ba代表gydF4y2Ba(gydF4y2Ba0gydF4y2Ba,gydF4y2Ba21gydF4y2Ba),gydF4y2Ba代表gydF4y2Ba(gydF4y2Ba1gydF4y2Ba,gydF4y2BancolgydF4y2Ba(gydF4y2BaexprsgydF4y2Ba(eset))gydF4y2Ba-gydF4y2Ba21gydF4y2Ba)))gydF4y2BaggydF4y2Ba
# #[1] 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 # #[39] 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 # #[77] 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 # #等级:0 1gydF4y2Ba
#对Tomlins数据应用opa,以检测相对于的异常值gydF4y2Ba#低10%(低。分位数=0.1)而且upper 5% (upper.quantile = 0.95 -- Default) of#基因表达。gydF4y2Batomlins.opa<-opagydF4y2Ba(esetgydF4y2Ba组=gydF4y2Ba克,gydF4y2Balower.quantile=0.1gydF4y2Ba)gydF4y2Batomlins.opagydF4y2Ba
## OPPARList类型对象##特征:663 ##样本:65 ##上分位数:0.95 ##下分位数:0.10 ##组:##[1]1 1 1 1 1 1 1 1 ##级别:0 1gydF4y2Ba
包含异常值概要的矩阵被称为gydF4y2BaprofileMatrixgydF4y2Ba
并且可以使用$操作符访问。的gydF4y2Baupper.quantilegydF4y2Ba
而且gydF4y2Balower.quantilegydF4y2Ba
用于运行函数的参数也可以使用此操作符检索。gydF4y2Ba
# # # # GSM141341 GSM141342 GSM141343 GSM141356 GSM141357 Hs6-1-10-7 0 0 0 0 0 # # Hs6-1-11-3 0 0 0 0 0 # # Hs6-1-12-24 0 0 0 0 0 # # Hs6-1-12-8 0 0 0 0 0 # # Hs6-1-13-12 0 0 0 0 0 # # Hs6-1-13-13 0 0 0 0 0gydF4y2Ba
## [1] 0.95gydF4y2Ba
## [1] 0.1gydF4y2Ba
我们可以提取任何个别样本的异常值轮廓gydF4y2BaprofileMatrixgydF4y2Ba
,使用gydF4y2BagetSampleOutliergydF4y2Ba
.看到gydF4y2BagetSampleOutlier ?gydF4y2Ba
欲了解更多详细信息gydF4y2Ba
# # GSM141341美元。up ## [1] "Hs6-26-18-3" ## ## $GSM141341。" # #[1]”Hs6-17-9-11 Hs6-2-11-4“# # # # GSM141357美元。# #[1]“Hs6-10-22-5”“Hs6-14-25-7”“Hs6-15-22-3”“Hs6-15-5-11”“Hs6-16-2-15”# #[6]“Hs6-16-9-2”“Hs6-18-9-13”“Hs6-20-13-20”“Hs6-20-7-7”“Hs6-22-21-5”# #[11]“Hs6-26-23-5”“Hs6-28-5-5”# # # # GSM141357美元。# #[1]“Hs6-13-3-14”“Hs6-22-5-9”“Hs6-24-7-23”“Hs6-25-12-19”“Hs6-25-2-9”gydF4y2Ba
在所有样本中提取下调和上调的异常值gydF4y2BagetSubtypeProbesgydF4y2Ba
:gydF4y2Ba
然后,我们可以获得GO术语的列表gydF4y2Baorg.Hs.eg.dbgydF4y2Ba
.列表中的每个元素都是一个GO术语,带有与该术语相对应的Entrez基因id。我们可以应用gydF4y2BamroastgydF4y2Ba
从gydF4y2BalimmagydF4y2Ba
多基因集富集检测包。gydF4y2Ba
#用limma::mroast检测基因集gydF4y2Ba# BiocManager::安装(org.Hs.eg.db)gydF4y2Ba图书馆gydF4y2Ba(org.Hs.eg.db)gydF4y2Ba图书馆gydF4y2Ba(limma)gydF4y2Baorg.Hs.egGO2EGgydF4y2Ba
人类的GO2EG地图(类"Go3AnnDbBimap"的对象)gydF4y2Ba
# # $: 0000002的# #助教IMP ISS小鬼小鬼NAS IMP IDA IEA IDA # #“291”“1890”“4205”“4358”“4976”“9361”“10000”“55186”“80119”“84275”# # IMP # # 92667 " ## ## $` 去:0000003 # # IBA IBA IEP IBA # #“2796”“2797”“8510”“286826 " ## ## $` 去:0000012 # # IDA IDA IDA IDA IEA IMP # #“1161”“2074”“3981”“7141”“7515”“23411”# # IBA IDA IBA IDA小鬼小鬼# #“54840”“54840”“55775”“55775”“55775”“200558”# # IEA # #”100133315 " ## ## $` 去:0000017 # # IDA IMP ISS IDA # #“6523”“6523”“6523”“6524”# # # #$ ' go:0000018 ' ## tas tas tas imp imp iep ## "3575" "3836" "3838" "9984" "10189" "56916" ## ## $ ' go:0000019 ' ## tas IDA ## "4361" "10111"gydF4y2Ba
利用limma的rost进行基因集分析gydF4y2Ba#需要根据异常值对基因表达数据进行子集gydF4y2Ba向上mtrx < -gydF4y2BaexprsgydF4y2Ba(eset) [gydF4y2BafDatagydF4y2Ba(eset)gydF4y2Ba$gydF4y2BaIDgydF4y2Ba%, %gydF4y2Baoutlier.list [[gydF4y2Ba《飞屋环游记》gydF4y2Ba]],)gydF4y2Ba#获取up.mtrx中基因的Entrez基因idgydF4y2Baentrez.ids.up.mtrx < -gydF4y2BafDatagydF4y2Ba(eset)gydF4y2Ba$gydF4y2Ba基因。ID (gydF4y2BafDatagydF4y2Ba(eset)gydF4y2Ba$gydF4y2BaIDgydF4y2Ba%, %gydF4y2BarownamesgydF4y2Ba(up.mtrx)]gydF4y2Ba#在基因表达矩阵中找到GO基因集的基因索引gydF4y2Bagset。idx < -gydF4y2Ba拉普兰人gydF4y2Ba(go2eggydF4y2Ba函数gydF4y2Ba(x) {gydF4y2Ba匹配gydF4y2Ba(x, entrez.ids.up.mtrx)gydF4y2Ba})gydF4y2Ba#删除缺失值gydF4y2Bagset。idx < -gydF4y2Ba拉普兰人gydF4y2Ba(gset.idxgydF4y2Ba函数gydF4y2Ba(x) {gydF4y2Bax (gydF4y2Ba!gydF4y2Bais.nagydF4y2Ba(x))gydF4y2Ba})gydF4y2Ba#删除少于10个元素的基因集gydF4y2Bagset。ls < -gydF4y2BaunlistgydF4y2Ba(gydF4y2Ba拉普兰人gydF4y2Ba(gset.idxlength))gset。idx < -gydF4y2Bagset.idx [gydF4y2Ba哪一个gydF4y2Ba(gset.lsgydF4y2Ba>gydF4y2Ba10gydF4y2Ba)]gydF4y2Ba#需要定义模型。mroast矩阵gydF4y2Ba设计< -gydF4y2Bamodel.matrixgydF4y2Ba(gydF4y2Ba~gydF4y2Bag)gydF4y2Ba向上mroast < -gydF4y2BamroastgydF4y2Ba(up.mtrxgydF4y2Ba指数=gydF4y2Bagset.idx,gydF4y2Ba设计=gydF4y2Ba设计)gydF4y2Ba头gydF4y2Ba(up.mroastgydF4y2Ban =gydF4y2Ba5gydF4y2Ba)gydF4y2Ba
## NGenes prodown proup方向PValue FDR PValue。混合罗斯福。混合## GO:0005615 20 01向上5e-04 5e-04 5e-04 5e-04 5e-04 5e-04 5e-04 5e-04 5e-04 5e-04 5e-04 5e-04 5e-04 5e-04 5e-04 5e-04 5e-04 5e-04 ## GO:0005794 11 01向上5e-04 5e-04 5e-04 5e-04 5e-04 5e-04 5e-04 5e-04 5e-04 5e-04 5e-04 5e-04 5e-04 5e-04 5e-04 5e-04 5e-04 ## GO:0019901 11 01向上5e-04 5e-04 5e-04 5e-04 5e-04 5e-04 5e-04 5e-04gydF4y2Ba
检测到的前10个GO id的GO术语gydF4y2BamroastgydF4y2Ba
可以通过以下方式检索。gydF4y2Ba
走了。从< -gydF4y2BarownamesgydF4y2Ba(up.mroast [gydF4y2Ba1gydF4y2Ba:gydF4y2Ba10gydF4y2Ba,)gydF4y2Ba# BiocManager::安装(GO.db)gydF4y2Ba图书馆gydF4y2Ba(GO.db)gydF4y2Ba列gydF4y2Ba(GO.db)gydF4y2Ba
##[1]“定义”“黄金”“本体”“术语”gydF4y2Ba
##[1]“定义”“黄金”“本体”“术语”gydF4y2Ba
r2tab < -gydF4y2Ba选择gydF4y2Ba(GO.dbgydF4y2Ba键=gydF4y2Bago.terms,gydF4y2Ba列=gydF4y2BacgydF4y2Ba(gydF4y2Ba“GOID”gydF4y2Ba,gydF4y2Ba“术语”gydF4y2Ba),gydF4y2Bakeytype =gydF4y2Ba“GOID”gydF4y2Ba)gydF4y2Bar2tabgydF4y2Ba
## GOID术语## 1 GO:0005615细胞外空间## 2 GO:0005576细胞外区域## 3 GO:0051301细胞分裂## 4 GO:0005794高尔基体## 5 GO:0019901蛋白激酶结合## 6 GO:0000785染色质## 7 GO:0003723 RNA结合## 8 GO:0005789内质网膜## 9 GO:0005887质膜的整体成分## 10 GO:0007165信号转导gydF4y2Ba
我们对下调的异常值重复上述步骤,以查看它们被强化的GO术语。gydF4y2Ba
人类的GO2EG地图(类"Go3AnnDbBimap"的对象)gydF4y2Ba
# # $: 0000002的# #助教IMP ISS小鬼小鬼NAS IMP IDA IEA IDA # #“291”“1890”“4205”“4358”“4976”“9361”“10000”“55186”“80119”“84275”# # IMP # # 92667 " ## ## $` 去:0000003 # # IBA IBA IEP IBA # #“2796”“2797”“8510”“286826 " ## ## $` 去:0000012 # # IDA IDA IDA IDA IEA IMP # #“1161”“2074”“3981”“7141”“7515”“23411”# # IBA IDA IBA IDA小鬼小鬼# #“54840”“54840”“55775”“55775”“55775”“200558”# # IEA # #”100133315 " ## ## $` 去:0000017 # # IDA IMP ISS IDA # #“6523”“6523”“6523”“6524”# # # #$ ' go:0000018 ' ## tas tas tas imp imp iep ## "3575" "3836" "3838" "9984" "10189" "56916" ## ## $ ' go:0000019 ' ## tas IDA ## "4361" "10111"gydF4y2Ba
#基于down异常值的基因表达矩阵子集gydF4y2Badown_mtrx < -gydF4y2BaexprsgydF4y2Ba(eset) [gydF4y2BafDatagydF4y2Ba(eset)gydF4y2Ba$gydF4y2BaIDgydF4y2Ba%, %gydF4y2Baoutlier.list [[gydF4y2Ba“向下”gydF4y2Ba]],)gydF4y2Baentrez_ids_down_mtrx < -gydF4y2BafDatagydF4y2Ba(eset)gydF4y2Ba$gydF4y2Ba基因。ID (gydF4y2BafDatagydF4y2Ba(eset)gydF4y2Ba$gydF4y2BaIDgydF4y2Ba%, %gydF4y2BarownamesgydF4y2Ba(down_mtrx)]gydF4y2Bagset_idx_down < -gydF4y2Ba拉普兰人gydF4y2Ba(go2eggydF4y2Ba函数gydF4y2Ba(x) {gydF4y2Ba匹配gydF4y2Ba(x, entrez_ids_down_mtrx)gydF4y2Ba})gydF4y2Ba#删除缺失值gydF4y2Bagset_idx_down < -gydF4y2Ba拉普兰人gydF4y2Ba(gset_idx_downgydF4y2Ba函数gydF4y2Ba(x) {gydF4y2Bax (gydF4y2Ba!gydF4y2Bais.nagydF4y2Ba(x))gydF4y2Ba})gydF4y2Ba#删除少于10个元素的基因集gydF4y2Bagset_ls_down < -gydF4y2BaunlistgydF4y2Ba(gydF4y2Ba拉普兰人gydF4y2Ba(长度)gset_idx_down)gydF4y2Bagset_idx_down < -gydF4y2Bagset_idx_down [gydF4y2Ba哪一个gydF4y2Ba(gset_ls_downgydF4y2Ba>gydF4y2Ba10gydF4y2Ba)]gydF4y2Ba#应用mroastgydF4y2Badown_mroast < -gydF4y2BamroastgydF4y2Ba(down_mtrx, gset_idx_down, design)gydF4y2Ba头gydF4y2Ba(down_mroastgydF4y2Ban =gydF4y2Ba5gydF4y2Ba)gydF4y2Ba
## NGenes prodown proup方向PValue FDR PValue。混合罗斯福。混合## GO:0005615 19 1 0向下5e-04 5e-04 5e-04 5e-04 5e-04 5e-04 5e-04 5e-04 5e-04 5e-04 ## GO:0046872 19 1 0向下5e-04 5e-04 5e-04 5e-04 5e-04 5e-04 5e-04 ## GO:0005794 15 1 0向下5e-04 5e-04 5e-04 5e-04 5e-04 5e-04 5e-04 5e-04 5e-04 5e-04 5e-04gydF4y2Ba
并提取前10个结果的GO项:gydF4y2Ba
go_terms_down < -gydF4y2BarownamesgydF4y2Ba(down_mroast [gydF4y2Ba1gydF4y2Ba:gydF4y2Ba10gydF4y2Ba,)gydF4y2Badr2tab < -gydF4y2Ba选择gydF4y2Ba(GO.dbgydF4y2Ba键=gydF4y2Bago_terms_down,gydF4y2Ba列=gydF4y2BacgydF4y2Ba(gydF4y2Ba“GOID”gydF4y2Ba,gydF4y2Ba“术语”gydF4y2Ba),gydF4y2Bakeytype =gydF4y2Ba“GOID”gydF4y2Ba)gydF4y2Badr2tabgydF4y2Ba
## GOID术语## 1 GO:0005615细胞外空间## 2 GO:0046872金属离子结合## 3 GO:0005739线粒体## 4 GO:0042802相同的蛋白质结合## 5 GO:0005794高尔基体## 6 GO:0005887质膜的整体组成部分## 7 GO:0000398 mRNA剪接,通过剪接体## 8 GO:0005829细胞质## 9 GO:0005886质膜## 10 GO:0016020膜gydF4y2Ba
我们现在将对Maupin的TGFb数据进行富集分析(参见gydF4y2Bamaupin ?gydF4y2Ba
),给出基因特征。的gydF4y2BamaupingydF4y2Ba
数据对象包含包含3个对照样品和3个TGFb诱导样品的基因表达测量值的矩阵。我们运行这个包中介绍的改进的gsva函数,对给定基因签名中富集的样本,无论是向下基因签名还是向上基因签名,都获得一个大的正分数。这是当原始的gsva函数对富集down基因签名的样本返回负得分,而对富集up基因签名的样本返回正得分。因此,这个包中gsva函数返回的分数是向上基因签名和向下基因签名的分数之和。注意,为了使修改后的gsva函数正常工作,需要使用gydF4y2Bagset.idx.listgydF4y2Ba
必须是一个命名列表,向上的签名基因列表被命名为“向上”,向下的签名基因列表被命名为“向下”(见下面的示例代码)。还要注意gydF4y2Bais.gset.list.up.downgydF4y2Ba
参数必须设置为TRUE,如果用户希望使用修改后的版本(即获得向上和向下基因签名的es分数之和)。看到gydF4y2Bagsva ?gydF4y2Ba
欲知详情。gydF4y2Ba
## [1] "data" "sig"gydF4y2Ba
## M_Ctrl_R1 M_Ctrl_R2 M_Ctrl_R3 M_TGFb_R1 M_TGFb_R2 M_TGFb_R3 ## 4.576038 ## 9 4.312850 4.155411 7.274249 7.520725 7.381180 7.279445 ## 10 4.699286 4.625667 4.624420 4.779147 4.845243 ## 12 5.524999 5.806786 5.891174 6.976169 7.200424 ## 14 9.0625984 9.075223 8.951924 9.062231 9.130251 9.204617gydF4y2Ba
## EntrezID符号upDown_integrative_signature upDown_comparative_signature ## 1 19 ABCA1 0 up ## 2 87 ACTN1 0 up ## 3 136 ADORA2B 0 down ## 4 182 JAG1 up up ## 5 220 ALDH1A3 down 0 ## 6 224 ALDH3A2 0 down ## upDown # 1 up ## 2 up ## 3 down ## 4 up ## 5 down ## 6 downgydF4y2Ba
geneSet < -gydF4y2BamaupingydF4y2Ba$gydF4y2Ba团体gydF4y2Ba$gydF4y2BaEntrezIDgydF4y2Ba#符号##EntrezID #上下基因:gydF4y2Baup_sig < -gydF4y2BamaupingydF4y2Ba$gydF4y2Basig (maupingydF4y2Ba$gydF4y2Ba团体gydF4y2Ba$gydF4y2Ba上下按钮gydF4y2Ba= =gydF4y2Ba《飞屋环游记》gydF4y2Ba,)gydF4y2Bad_sig < -gydF4y2BamaupingydF4y2Ba$gydF4y2Basig (maupingydF4y2Ba$gydF4y2Ba团体gydF4y2Ba$gydF4y2Ba上下按钮gydF4y2Ba= =gydF4y2Ba“向下”gydF4y2Ba,)gydF4y2Bau_geneSet < -gydF4y2Baup_siggydF4y2Ba$gydF4y2BaEntrezIDgydF4y2Ba# up_sig$Symbol ## EntrezIDgydF4y2Bad_geneSet < -gydF4y2Bad_siggydF4y2Ba$gydF4y2BaEntrezIDgydF4y2Baenrichment_scores < -gydF4y2BagsvagydF4y2Ba(maupingydF4y2Ba$gydF4y2Ba数据,gydF4y2Ba列表gydF4y2Ba(gydF4y2Ba了=gydF4y2Bau_geneSet,gydF4y2Ba下来=gydF4y2Bad_geneSet),gydF4y2Bamx.diff =gydF4y2Ba1gydF4y2Ba,gydF4y2Baverbose =gydF4y2Ba真正的gydF4y2Ba,gydF4y2Baabs.ranking =gydF4y2Ba假gydF4y2Ba,gydF4y2Bais.gset.list.up.down =gydF4y2Ba真正的gydF4y2Ba,gydF4y2Ba平行的。深圳=gydF4y2Ba1gydF4y2Ba)gydF4y2Ba$gydF4y2Baes.obsgydF4y2Ba
##估计2个基因集的GSVA评分。计算观察浓缩分数# # # #在微阵列数据估计ECDFs高斯核内核使用与# # 1 ## | | | 0 % | |=================================== | 50 % | |======================================================================| 100%gydF4y2Ba
M_Ctrl_R1 M_Ctrl_R2 M_Ctrl_R3 M_TGFb_R1 M_TGFb_R2 M_TGFb_R3 GeneSet -0.8991905 -0.7841492 -0.8329552 0.9041564 0.7714735 0.8147947gydF4y2Ba
使用ssgsea方法计算富集分数gydF4y2Ba# es.dif.ssg <- gsa (maupin, list(up = u_geneSet, down= d_geneSet),gydF4y2Ba# verbose=TRUE, abs.ranking=FALSE, is.gset.list.up.down=TRUE,gydF4y2Ba# method = "ssgsea")gydF4y2Ba
浓缩分数的直方图如下所示,TGFb样本的es分数密度用红色表示。对照样本的es得分分布以蓝色表示。从下图中可以看出,预期在给定TGFb签名中富集的TGFb诱导样本已经获得了正分数,位于直方图的右侧,而对照样本位于直方图的左侧。此外,TGFb诱导样品和对照样品已经很好地彼此分离。gydF4y2Ba
嘘gydF4y2Ba(enrichment_scoresgydF4y2Ba主要=gydF4y2Ba“浓缩的分数”gydF4y2Ba,gydF4y2Baxlab =gydF4y2Ba“西文”gydF4y2Ba)gydF4y2Ba行gydF4y2Ba(gydF4y2Ba密度gydF4y2Ba(enrichment_scores [,gydF4y2Ba1gydF4y2Ba:gydF4y2Ba3.gydF4y2Ba]),gydF4y2Ba坳=gydF4y2Ba“蓝色”gydF4y2Ba)gydF4y2Ba#对照样品gydF4y2Ba行gydF4y2Ba(gydF4y2Ba密度gydF4y2Ba(enrichment_scores [,gydF4y2Ba4gydF4y2Ba:gydF4y2Ba6gydF4y2Ba]),gydF4y2Ba坳=gydF4y2Ba“红色”gydF4y2Ba)gydF4y2Ba# TGFb样品gydF4y2Ba传说gydF4y2Ba(gydF4y2Ba“topleft”gydF4y2Ba,gydF4y2BacgydF4y2Ba(gydF4y2Ba“控制”gydF4y2Ba,gydF4y2Ba“TGFb”gydF4y2Ba),gydF4y2Balty =gydF4y2Ba1gydF4y2Ba,gydF4y2Ba坳=gydF4y2BacgydF4y2Ba(gydF4y2Ba“蓝色”gydF4y2Ba,gydF4y2Ba“红色”gydF4y2Ba),gydF4y2Bacex =gydF4y2Ba0.6gydF4y2Ba)gydF4y2Ba